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細(xì)胞簡介：

食管纖維瘤來源于食管肌層，多數(shù)位于食管下段，腫瘤體硬，呈膨脹性生長。一般病程較長，數(shù)月直數(shù)年不等，為常見的良性食管腫瘤，多發(fā)性。體外分離和培養(yǎng)食管纖維瘤細(xì)胞，為研究食管纖維瘤生物學(xué)特性、機(jī)理等奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

細(xì)胞特性：

1）細(xì)胞來源于人食管腫瘤組織。

2）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

3）細(xì)胞生長方式：長梭形，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 Delf原代腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

GFAPELISAKit

大鼠白血病抑制因子受體(LIFR)elisa分析檢測試劑盒

LIFR ELISA Kit

人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)elisa分析檢測試劑盒

HumanTIMP-3ELISAKit

運(yùn)動神經(jīng)元生存蛋白1  Anti-SMN1

磷酸化染色體濃縮調(diào)控蛋白1抗體  Anti-Phospho-RCC1 (Ser11)

細(xì)胞粘附分子3抗體（受體相關(guān)蛋白3）  Anti-Nectin 3

鋅指蛋白146抗體  Anti-ZNF146

魚熱休克蛋白40(HSP-40)elisa分析檢測試劑盒

HSP-40 ELISA Kit

人腸道病毒71型(EV71)抗體(IgM)elisa分析檢測試劑盒

Humanenterovirus71virus(EV71)antibody(gM)ELISAkit

糖原磷酸化酶a（GPa）試劑盒

細(xì)胞牛病毒性腹瀉病毒（Bovine Viral Diarrhoea Virus；BVDV）

溶酶體膜通透性（LMP）吖啶橙熒光檢測試劑盒

大鼠腫瘤壞死因子γ(TNF-γ)elisa檢測試劑盒

NDUFS8蛋白抗體

NDUFS8

6號染色體開放閱讀框57抗體

C6orf57

微管蛋白4α抗體  Anti-TUBA4A

磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體  Anti-phospho-P70 S6 Kinase beta (Thr228)

少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子2抗體  Anti-OLIG2

分泌細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白1抗體  Anti-SFRP2/SARP1

堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的兔抗人IgG H&L

猴補(bǔ)體蛋白5(C5)elisa生化檢測試劑盒

C5 ELISA kit

人兒茶酚抑素elisa生化檢測試劑盒

人食管纖維瘤細(xì)胞HumancatestatinELISAKit

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。