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產(chǎn)品名稱：堪薩斯分枝桿菌LAMP試劑盒
產(chǎn)品特點(diǎn)：堪薩斯分枝桿菌LAMP試劑盒上海一研生物相關(guān)產(chǎn)品：2,7-二溴-9-咔唑：401.12,7- dibromo -9- phenyl carbazole：444796-09-2 C18H11Br2N3-甲-5異噁唑：98.13- methyl -5 aminoisoxazole：14678-02-5 C4H6N2O苦味Picric acid：229.1 C6H3N3O7CAS
產(chǎn)品型號(hào)：50次
更新日期：2021-02-20
訪問次數(shù)：735
50次堪薩斯分枝桿菌LAMP試劑盒的詳細(xì)資料：
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱 | 堪薩斯分枝桿菌LAMP試劑盒 |
英文名稱 | Lamp kit for Mycobacterium Kansas |
規(guī)格 | 50次 |
儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
4-溴-2-乙-1-：310.964- -2- -1- iodobenzene ethyl bromide：175278-30-5 C8H8BrI
二乙酰：116.12Two acetyl hydrazine：3148-73-0 C4H8N2O2
硫酸：314.36Phenylhydrazine sulfate：52033-74-6 C12H16N4·H2SO4
十一烷：232.4Eleven benzene：6742-54-7 C17H28
2,7-二溴-9-咔唑：401.12,7- dibromo -9- phenyl carbazole：444796-09-2 C18H11Br2N
3-甲-5異噁唑：98.13- methyl -5 aminoisoxazole：14678-02-5 C4H6N2O
苦味Picric acid：229.1 C6H3N3O7：88-89-1
1-(二甲乙甲硅烷)咪唑：154.291- (two methyl ethyl methyl group)：62365-34-8 C7H14N2Si
5-丁-并三唑：175.235- butyl benzene and three：3663-24-9 C10H13N3
堪薩斯分枝桿菌LAMP試劑盒人 EHHADH 基因全長ORF克隆
人 PON3 / Paraoxonase 3 (50 Ser/Asn) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 EFNA1 / Ephrin-A1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 LAT2 基因全長ORF克隆
人 SPOP 基因全長ORF克隆
人 SMURF1 基因全長ORF克隆
人 SDF2 基因全長ORF克隆
人 IGF1R / CD221 / CD221 ELISA配對抗體
人 CCDC70 基因全長ORF克隆
人 INF2 基因全長ORF克隆
食蟹猴 IL2RA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 USP32 基因全長ORF克隆
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