產品名稱：口腔支原體LAMP試劑盒
產品特點：口腔支原體LAMP試劑盒上海一研生物相關產品：2,3-二-5-（4-甲氧）氯四氮唑：364.832,3- two - -5- （4- methoxyphenyl） tetrazolium chloride：10560-45-9 C20H17ClN4O2-吡：155.22- phenyl pyridine：1008-89-5 C11H9N5-溴-2,4-二氯嘧：227.875
產品型號：50次
更新日期：2021-02-20
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50次口腔支原體LAMP試劑盒的詳細資料：
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
參數規格：
產品名稱 | 口腔支原體LAMP試劑盒 |
英文名稱 | Lamp kit for oral Mycoplasma |
規格 | 50次 |
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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數值為橫軸，繪制標準曲線。
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
6-溴靛紅Isatin 6- bromide：226.03 C8H4BrNO2：77603-45-3
3-甲-4-溴吡唑：1613- methyl -4-：13808-64-5 C4H5BrN2
2,3-二-5-(4-甲氧)氯四氮唑：364.832,3- two - -5- (4- methoxyphenyl) tetrazolium chloride：10560-45-9 C20H17ClN4O
2-吡：155.22- phenyl pyridine：1008-89-5 C11H9N
5-溴-2,4-二氯嘧：227.875- two chloride：36082-50-5 C4HBrCl2N2
6,6'-二-2-甲吡：184.246,6'- two -2- methyl pyridine：4411-80-7 C12H12N2
*(4-吡)錫：241.91Three methyl (4- Pi Dingji) tin：59020-06-3 C8H13NSn
六氨合氯鈷：267.47Six ammonia chloride：10534-89-1 H18Cl3CoN6
2-甲-5-硝對二胺2- methyl -5- nitro group two：167.17 C7H9N3O2：25917-89-9
口腔支原體LAMP試劑盒人 EGFL7 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
人 PDCD4 轉錄變體1 基因全長ORF克隆
大鼠 VEGF-D / VEGFD / FIGF 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 BTG2 基因全長ORF克隆
重組食蟹猴 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (His 標簽)
食蟹猴 Ephrin-A5 / EFNA5 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 FXYD5 基因全長ORF克隆
大鼠 GDNF 基因全長ORF克隆
人 ESRP1 基因全長ORF克隆
小鼠 CCL8 基因全長ORF克隆
人 CDK8 基因全長ORF克隆
人 DTX3L 基因全長ORF克隆
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