產(chǎn)品名稱：重組小鼠骨形態(tài)發(fā)生蛋白-4（BMP-4)
產(chǎn)品特點：重組小鼠骨形態(tài)發(fā)生蛋白-4（BMP-4)的相關(guān)產(chǎn)品：Gentamicin/FITC 熒光素標記慶大 1mlGentamicin/FITC 熒光素標記慶大重組人 CD16b / FCGR3B 蛋白 (His 標簽)CD55重組大鼠 CD55 / DAF 蛋白 ProteinMET Protein Mouse 重組小鼠 c-MET / HGFR 蛋白
產(chǎn)品型號：
更新日期：2024-11-19
訪問次數(shù)：387
重組小鼠骨形態(tài)發(fā)生蛋白-4（BMP-4)的詳細資料：
產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：
產(chǎn)品英文名稱：Mouse BMP-4 protein
產(chǎn)品中文名稱：重組小鼠骨形態(tài)發(fā)生蛋白-4（BMP-4)
規(guī)格：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg
貨號：EY-01X8702
用途：僅供科研研究實驗
特點&優(yōu)勢:
標簽:無標簽
表達宿主:大腸桿菌
種屬:小鼠
序列:氨基酸序列來源于小鼠源：BMP-4 (Lys303-Arg408)(P21275) 表達的蛋白片段，C-端帶有 6×His 標記。
活性:通過其誘導(dǎo) ATDC5 細胞產(chǎn)生堿性磷酸酶的能力來衡量。這種效應(yīng)的ED50<10 ng/mL。重組小鼠BMP-4的特異性活性:大于1 x 10? IU/mg。
蛋白長度：該蛋白質(zhì)的計算分子量為 12.88 kDa，在還原條件下，該蛋白質(zhì)以 11-17 kDa 的形式遷移（SDS-PAGE 分析）。
純度:> 98 % 動?動
背景
骨形態(tài)發(fā)生蛋白-4（BMP-4）的分子質(zhì)量為 13 kDa，是一種重要的調(diào)節(jié)分子，在整個人類發(fā)育過程中對中胚層誘導(dǎo)、牙齒發(fā)育、肢體形成、骨誘導(dǎo)和骨折修復(fù)起著重要作用。BMP-4 是胚胎早期分化和建立背-腹軸所需的關(guān)鍵信號分子。BMP-4 由脊索背側(cè)部分分泌，它與聲刺猬協(xié)同作用，為后期結(jié)構(gòu)的分化建立背-腹軸。
本產(chǎn)品具有下列特點:
1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。
2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。
3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。
4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。
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PROM1 Protein Rat 重組大鼠 CD133 / PROM1 / Prominin 1 蛋白 (His 標簽)
操作步驟：
(一)獲得目的基因
1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。
2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。
(二)構(gòu)建重組表達載體
1、載體酶切:將表達質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。
2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。
(三) 獲得含重組表達質(zhì)粒的表達菌種
1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。
2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。
3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。
(四)誘導(dǎo)表達
1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。
2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。
3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。
4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。
5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。
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