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細胞簡介：

大鼠附睪上皮分離自附睪組織；附睪（Epididymis）是一個由曲折、細小的管子構(gòu)成的器官，一端接著輸精管（Ductusdeferens），一端接著睪丸（Testis）的曲細精管，具體結(jié)構(gòu)主要包括輸出小管和附睪管。附睪緊貼睪丸的上端和后緣，可分為頭、體、尾三部。精子離開睪丸后通過輸出小管進入附睪。附睪具有暫存精液并分泌附睪液營養(yǎng)精子的功能，以促進精子的進一步成熟附睪的功能是暫存精子，促進精子的進一步成熟。精子在附睪內(nèi)獲得運動能力，總共停留8～17天，最終達到功能上的成熟。在這個過程中，精子除了自身的因素，還受到附睪微環(huán)境的影響，這包括了一系列的物理、化學(xué)變化和精子形態(tài)的改變。可以說，附睪微環(huán)境正常穩(wěn)定是附睪發(fā)揮促成熟這一功能的必要條件。若附睪的功能發(fā)生異常，精子則不能成熟，引起不育。附睪上皮含有主細胞、基細胞、亮細胞等幾種類型細胞。基細胞，其頂部離附睪管腔有一定距離，在附睪各部分，其形態(tài)沒有差別，一般認為是貯備細胞；另一種主細胞，是維持附睪生理功能的物質(zhì)基礎(chǔ)，在各區(qū)段的主細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)差別很大，這也反映出各區(qū)段的生理功能的差異。除上皮細胞外，附睪的管壁組織結(jié)構(gòu)也有規(guī)律性的變化，附睪管起始段平滑肌有自發(fā)地節(jié)律性收縮，而尾部平滑肌就沒有這種特點，僅在射精一瞬間出現(xiàn)強烈的節(jié)律收縮。作為負責提供適合精子成熟微環(huán)境的附睪，具有活躍的分泌與吸收功能。其中，附睪上皮的電解質(zhì)和水分的轉(zhuǎn)運，對保持附睪內(nèi)合適的離子濃度和酸堿度，為精子成熟提供適宜的環(huán)境起著相當重要的作用。睪丸的支持細胞每天能產(chǎn)生大量睪網(wǎng)液，如一只公羊每天約能分泌40毫升睪網(wǎng)液，而從附睪排出的只不過幾百微升，也就是說睪丸分泌液有99%被附睪上皮重新吸收回體內(nèi)。動物實驗表明，結(jié)扎輸精管時睪丸不會腫脹，但若結(jié)扎睪丸輸出小管，睪丸天就會腫脹，這就充分證實了附睪存在著強有力的吸收功能，但是重新吸收的意義尚不清楚。體外培養(yǎng)附睪上皮細胞對精子的發(fā)育、成熟，，附睪生理基礎(chǔ)功能研究具有重要意義。

方法簡介：

實驗室分離的大鼠附睪上皮采用膠原酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的大鼠附睪上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：含FBS、EGF、Hydrocortisone、腎上腺素、甲狀腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠附睪上皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的培養(yǎng)狀態(tài)。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶2(CAMK 2)檢測試劑盒 ，英文名： CAMK 2 ELISA Kit

Pulmonary surfacta associated protein A (SP-A) ELISA Kit 豬肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)檢測試劑盒

轉(zhuǎn)基因植物EPSPS基因核酸檢測試劑盒 48T

CLIAKitforMCAbELISAKit大鼠黑色素細胞抗體

體液血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)活性熒光定量檢測試劑盒20次

ELISAKitAβ1-40馬β淀粉樣蛋白1-40

GHR重組小鼠 Growth Hormone Receptor / GHR / GHBP 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

CG6856-PA peptide CG6856-PA抗原 0.5mgCG6856-PA peptide CG6856-PA抗原

AKR1A1重組人 AKR1A1 蛋白 Protein

CAT Protein Human 重組人 CAT / Catalase 蛋白

IL13RA1 Protein Mouse 重組小鼠 IL-13Ra1 蛋白 (His & Fc 標簽)

CG6856-PA peptide CG6856-PA抗原 0.5mgCG6856-PA peptide CG6856-PA抗原

CAT Protein Human 重組人 CAT / Catalase 蛋白

GHR重組小鼠 Growth Hormone Receptor / GHR / GHBP 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

IL13RA1 Protein Mouse 重組小鼠 IL-13Ra1 蛋白 (His & Fc 標簽)

AKR1A1重組人 AKR1A1 蛋白 Protein

小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai mated ciullinated vimein aibody (MCV) ELISA Kit 人抗突變型瓜波形蛋白抗體(MCV)檢測試劑盒

Human1,5-anhydroglucitol,1,5-AGELISAKit 人1,5-脫水葡萄糖醇/1,5-脫水山梨(1,5-AG)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforACA-IgM(Humanai-cardiolipinaibodyIgM)ELISAKit人抗心0脂抗體IgM

藥品糖精(saccharin)含量紫外光譜法定量檢測試劑盒20次

Mouseoxidizidedglathione,GSGSELISAKit小鼠氧化型(GSGS)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠附睪上皮細胞鴨白介素1(IL-1)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

鴨γ干擾素(IFN-γ)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

鴨α干擾素(IFN-α)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。