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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠股骨頭微血管內(nèi)皮分離自骨組織；股骨頭（caput femoris）呈圓形，約占一圓球的2/3，其上為關(guān)節(jié)軟骨所覆蓋，在其頂部微后有一小窩，稱為股骨頭凹，為股骨頭韌帶附著處，股骨頭可由此獲得少量血供。股骨頭骨髓的微血管結(jié)構(gòu)為珊瑚狀，后毛細(xì)血管微動(dòng)脈與微靜脈部分膨大、迂曲、互相纏繞；骨微血管內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成了骨內(nèi)微血管的內(nèi)襯，與骨內(nèi)其他成分聯(lián)系密切，參與了許多骨的病理生理過(guò)程在骨吸收新骨的形成血管再生營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)骨內(nèi)代謝產(chǎn)物輸出及維持骨內(nèi)微環(huán)境平衡方面具有重要作用。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠股骨頭微血管內(nèi)皮采用混合膠原酶消化制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠股骨頭微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，細(xì)胞純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳1-3代左右；2代以內(nèi)狀態(tài)

消化液：0.25%，Accutase

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠股骨頭微血管內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠釋放激素受體抗體(GHR-Ab)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： GHR-Ab ELISA Kit

Porcine ansforming growth factor beta 1 (TGF- beta 1) ELISA Kit 豬轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)檢測(cè)試劑盒

ELISA 小鼠細(xì)胞凋亡相關(guān)基因(mouse BCL-2)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforLLO(HumanlisteriolysinO)ELISAKit人單核細(xì)胞增多性李斯特菌素O

通用型DNA氧化損傷AP位點(diǎn)比色法定量分析試劑盒20次

ELISAKitPAL雞L苯解氨酶

SELP重組大鼠 SELP / P Selectin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

COMP 軟骨寡聚基質(zhì)蛋白抗原 0.5mgCOMP 軟骨寡聚基質(zhì)蛋白抗原

ISG15重組人 ISG15 / G1P2 蛋白 Protein

CCL11 Protein Human 重組人 CCL11 蛋白

SELL Protein Mouse 重組小鼠 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白

COMP 軟骨寡聚基質(zhì)蛋白抗原 0.5mgCOMP 軟骨寡聚基質(zhì)蛋白抗原

CCL11 Protein Human 重組人 CCL11 蛋白

SELP重組大鼠 SELP / P Selectin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

SELL Protein Mouse 重組小鼠 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白

ISG15重組人 ISG15 / G1P2 蛋白 Protein

小鼠中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai insulin receptor aibody (AIRA) ELISA Kit 人抗胰島素受體抗體(AIRA)檢測(cè)試劑盒

HumanArachidonicAcid,AAELISAKit 人花生四烯酸(AA)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforABCA1(HumanATP-bindingcassetteanspoerA1)ELISAKit人腺苷三0酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1

伊文思藍(lán)(EVANSBLUE)植物細(xì)胞繁殖測(cè)定試劑盒100次

Mousenicotinamideadeninedinucleotidephosphate,NADPHELISAKit小鼠腺嘌呤二核苷酸0酸(NADPH)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠股骨頭微血管內(nèi)皮細(xì)胞血小板膜糖蛋白 (GP IIb/IIIa)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

生長(zhǎng)相關(guān)因子 (GRO)    作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

生長(zhǎng)相關(guān)因子 α(GRO α)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

過(guò)氧化物酶 (GSH-Px)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。