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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人子宮頸上皮分離自子宮頸組織；子宮頸位于子宮下部，近似圓錐體，上端與子宮體相連，下端深入陰道。陰道頂端的穹隆又將子宮頸分為兩部分：宮頸突入陰道的部分稱宮頸陰道部，在陰道穹隆以上的部分稱宮頸陰道上部。宮頸的中央為前后略扁的長(zhǎng)梭性管腔，其上端通過(guò)宮頸內(nèi)口與子宮腔相連，其下端通過(guò)宮頸外口開(kāi)口于陰道。內(nèi)外口之間即宮頸管。宮頸的大小與宮體比例隨年齡及內(nèi)分泌狀態(tài)等而變化；宮頸壁由黏膜、肌層和外膜組成。子宮頸可有多種疾病，包括胚胎發(fā)育異常、炎癥、瘤樣病變、良性腫瘤、惡性腫瘤、損傷、宮頸性不孕、輔助生育技術(shù)、宮頸與性、宮頸妊娠等許多問(wèn)題，體外培養(yǎng)的子宮頸上皮細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人子宮頸上皮采用膠原酶消化法，結(jié)合上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人子宮頸上皮經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠輕肽鐵蛋白(FTL)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： FTL ELISA Kit

Mouse angiopoietin 1 (ANG-1) ELISA Kit 小鼠血管生成素1(ANG-1)檢測(cè)試劑盒

Ratprostatespecificaigen,PSAELISAKit 大鼠前列腺特異性抗原(PSA)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforGSH-Pxkit(human)人過(guò)氧化物酶檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白3(SI3)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Ratypsinogenactivationpeptide,TAPELISAKit大鼠原激活肽(TAP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

CLEC6A重組小鼠 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 蛋白 Protein

CD3 epsilon peptide CD3 epsilon(抗原 0.5mgCD3 epsilon peptide CD3 epsilon(抗原)

CCDC134重組人 CCDC134 蛋白 Protein

HNMT Protein Human 重組人 HNMT / Histamine N-methyltransferase 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

CD14 Protein Rat 重組大鼠 CD14 蛋白

CD3 epsilon peptide CD3 epsilon(抗原 0.5mgCD3 epsilon peptide CD3 epsilon(抗原)

HNMT Protein Human 重組人 HNMT / Histamine N-methyltransferase 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

CLEC6A重組小鼠 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 蛋白 Protein

CD14 Protein Rat 重組大鼠 CD14 蛋白

CCDC134重組人 CCDC134 蛋白 Protein

小鼠IgG Fc片段(IgGFcγ)檢測(cè)試劑盒 96T/48T

Rat advanced glycation end products (AGEs) ELISA Kit 大鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)檢測(cè)試劑盒

HumahromboxaneB2,TX-B2ELISAKit 人血栓素B2(TXB2)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanCollagenaseTypeII檢測(cè)試劑盒人膠原酶II(CollagenaseII)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織ABL1激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

HumaeceptorⅢfoheFcregionofimmunoglobulinG,FcγRⅢELISAKitGFc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人子宮頸上皮細(xì)胞兔抗腦組織抗體(ABAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔p53(p53)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔(ADR)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。